فلوئورسین ایزوتیوسیانات

فروش فلورسئین ایزوتیوسیانات

فلوئورسئین ایزوتیوسیانات (FITC) یک رنگ فلورسنت آلی مشتق‌شده از فلوئورسئین است که در ساختار خود دارای گروه واکنش‌پذیر ایزوتیوسیانات (–N=C=S) می‌باشد. این گروه شیمیایی امکان اتصال کووالانسی پایدار FITC به پروتئین‌ها، پپتیدها و سایر زیست‌مولکول‌های دارای گروه آمینی را فراهم می‌کند.

نکته کلیدی:
FITC یک فلوروفر کونژوگه‌شونده است، نه صرفاً یک رنگ ساده.

ساختار شیمیایی FITC

از نظر ساختار مولکولی، FITC از دو بخش اصلی تشکیل شده است:

• هسته فلوئورسئین (مسئول خاصیت فلورسانس)

• گروه ایزوتیوسیانات فعال (مسئول اتصال شیمیایی)

فرمول شیمیایی FITC معمولاً به‌صورت زیر بیان می‌شود:

C₂₁H₁₁NO₅S

وجود گروه ایزوتیوسیانات باعث می‌شود FITC به‌راحتی با گروه‌های آمینی آزاد (–NH₂) واکنش داده و پیوند تیواوره پایدار ایجاد کند.

خواص نوری و فلورسانس FITC

طیف جذب و نشر

یکی از مهم‌ترین ویژگی‌های FITC، مشخصات نوری آن است:

• حداکثر طول موج جذب (Excitation): حدود ۴۹۰ نانومتر

• حداکثر طول موج نشر (Emission): حدود ۵۲۰ نانومتر

• نشر نور سبز روشن

این ویژگی باعث شده FITC به‌خوبی با میکروسکوپ فلورسانس، فلوسایتومتری و سیستم‌های تصویربرداری زیستی سازگار باشد.

فلوئورسین ایزوتیوسیانات FITC

شدت فلورسانس و کوانتوم ییلد

• شدت فلورسانس نسبتاً بالا

• کوانتوم ییلد مناسب در محیط‌های آبی

• حساس به pH (کاهش فلورسانس در pH پایین)

نکته مهم:
فلورسانس FITC در محیط‌های اسیدی کاهش می‌یابد، بنابراین شرایط بافری اهمیت بالایی دارد.

مکانیسم اتصال FITC به زیست‌مولکول‌ها

اتصال به پروتئین‌ها

FITC به‌طور عمده با:

• گروه‌های آمینی لیزین

• انتهای N-terminal پروتئین‌ها

واکنش می‌دهد.

این واکنش معمولاً در شرایط:

• pH قلیایی ملایم (۸–۹)

• در بافرهایی مانند کربنات یا بورات

انجام می‌شود.

نوع پیوند شیمیایی

• تشکیل پیوند کووالانسی تیواوره

• اتصال پایدار و نسبتاً غیرقابل‌برگشت

این پیوند پایدار، FITC را به نشانگری مناسب برای مطالعات بلندمدت تبدیل می‌کند.

انواع و گریدهای FITC

FITC در گریدهای مختلفی عرضه می‌شود:

• گرید آزمایشگاهی (Laboratory Grade)

• گرید بیولوژیکی / ایمونولوژیکی

• FITC-Labelled Antibodies

• FITC-Labelled Proteins & Dextrans

انتخاب گرید مناسب تأثیر مستقیم بر کیفیت نتایج آزمایش دارد.

روش‌های کونژوگه‌کردن FITC

۱. کونژوگاسیون مستقیم

در این روش:

• FITC مستقیماً به پروتئین یا آنتی‌بادی متصل می‌شود

• ساده و سریع است

• نیاز به خالص‌سازی پس از واکنش دارد

۲. کونژوگاسیون کنترل‌شده

• کنترل نسبت FITC به پروتئین

• کاهش خاموشی فلورسانس

• مناسب مطالعات دقیق کمی

کاربردهای FITC در علوم زیستی

ایمونوفلورسانس (Immunofluorescence)

یکی از مهم‌ترین کاربردهای FITC:

• نشاندارسازی آنتی‌بادی‌ها

• شناسایی آنتی‌ژن‌ها در سلول و بافت

• بررسی توزیع مکانی پروتئین‌ها

FITC هنوز یکی از فلوروفرهای استاندارد در ایمونوفلورسانس محسوب می‌شود.

فلوسایتومتری (Flow Cytometry)

در فلوسایتومتری، FITC به‌طور گسترده برای:

• شناسایی مارکرهای سطحی سلول

• آنالیز جمعیت‌های سلولی

• بررسی بیان پروتئین‌ها

به کار می‌رود.

میکروسکوپ فلورسانس

• تصویربرداری از سلول‌ها و بافت‌ها

• بررسی دینامیک مولکولی

• ردیابی زیست‌مولکول‌ها

کاربردهای FITC در بیوشیمی و بیوتکنولوژی

• نشاندارسازی پروتئین‌ها

• ردیابی مسیرهای بیوشیمیایی

• بررسی برهم‌کنش پروتئین–پروتئین

• مطالعات اتصال لیگاند–رسپتور

کاربرد FITC در پزشکی و تشخیص

در برخی روش‌های تشخیصی:

• تست‌های ایمونولوژیک

• تشخیص آنتی‌بادی‌ها

• کیت‌های تحقیقاتی تشخیص بیماری‌ها

FITC نقش کلیدی در توسعه روش‌های تشخیص مولکولی ایفا کرده است.

مزایای فلوئورسئین ایزوتیوسیانات

• شدت فلورسانس مناسب

• قیمت اقتصادی نسبت به فلوروفرهای جدید

• دسترسی آسان

• سازگاری با تجهیزات استاندارد

• تجربه و داده‌های گسترده در ادبیات علمی

محدودیت‌ها و معایب FITC

• حساسیت به نور (Photobleaching)

• وابستگی فلورسانس به pH

• هم‌پوشانی طیفی با برخی فلوروفرها

• پایداری کمتر نسبت به رنگ‌های نسل جدید (Alexa Fluor، Cy dyes)

به همین دلیل، در برخی کاربردهای پیشرفته از جایگزین‌های جدیدتر استفاده می‌شود.

نکات ایمنی و کار با FITC

• FITC ماده‌ای تحریک‌کننده است

• از تماس با پوست و چشم جلوگیری شود

• استفاده از دستکش و عینک ایمنی

• نگهداری در ظروف تیره و دور از نور

شرایط نگهداری FITC

• نگهداری در دمای ۲–۸ درجه سانتی‌گراد

• دور از نور مستقیم

• در محیط خشک

• محلول‌های آماده باید تازه تهیه شوند

نور و رطوبت دشمن اصلی FITC هستند.

اهمیت FITC در پژوهش‌های مدرن

با وجود توسعه فلوروفرهای پیشرفته، FITC همچنان نقش مهمی در آموزش، تحقیقات پایه و بسیاری از پروژه‌های تحقیقاتی ایفا می‌کند. سادگی استفاده، قیمت مناسب و سازگاری با تجهیزات موجود باعث شده این ماده همچنان پرکاربرد باقی بماند.

جمع‌بندی نهایی

فلوئورسئین ایزوتیوسیانات (FITC) یکی از مهم‌ترین و پرکاربردترین نشانگرهای فلورسنت در علوم زیستی و پزشکی است که به‌واسطه ساختار شیمیایی هوشمندانه، قابلیت اتصال کووالانسی به زیست‌مولکول‌ها و خواص نوری مناسب، نقش کلیدی در توسعه روش‌های ایمونوفلورسانس، فلوسایتومتری و تصویربرداری زیستی داشته است. با وجود برخی محدودیت‌ها، FITC همچنان به‌عنوان یک ابزار استاندارد و قابل‌اعتماد در آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد و انتخاب صحیح شرایط استفاده از آن، تضمین‌کننده نتایج دقیق و قابل تکرار خواهد بود.